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親和柱使用要點分析

更新時間:2024-01-09      點擊次數(shù):812
  親和柱原理
 
  樣品經(jīng)提取液提取、過濾、稀釋,然后通過鍵合有特殊抗體的免疫親和柱。此時,分析目標(biāo)物被親和柱中的抗體特異性的吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將目標(biāo)物從親和柱上洗脫下來。之后,用檢測儀器進(jìn)行定量檢測。
 
  親和柱使用要點:
 
  1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、若偏酸或偏堿,可用PBS稀釋調(diào)節(jié);
 
  2、樣品添加回收試驗時,標(biāo)準(zhǔn)品添加到樣品中,靜置2小時后或過夜,再進(jìn)行樣品前處理,否則會出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象。
 
  3、親和柱樣品過柱洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;
 
  4、注意親和柱的柱容量,若超過柱容量,上柱前請稀釋;
 
  5、如果將標(biāo)準(zhǔn)品直接過柱驗證回收率時,一定要確保標(biāo)準(zhǔn)上柱液中有機(jī)濃度不要超過25%,否則會影響柱子的吸附能力。
 
  6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因為緩沖液凍結(jié),會嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu),對質(zhì)量影響很大,同時注意柱內(nèi)保護(hù)液面,若泄露導(dǎo)致瓊脂干燥萎,請勿使用;
 
  7、試驗中使用的玻璃儀器等,一定要清洗干凈,尤其是用次氯酸等處理過的儀器,否則會使檢測結(jié)果偏低。
 

 

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